Column 이해2 및 세척방법

컬럼은 크게 순상(normal phase)과 역상(Reverse phase)로 나뉜다.

출처 : Thermofisher HILIC LC Columns care guide

순상컬럼: 컬럼은 이동상보다 극성을 띄며, 비극성 화합물이 극성 화합물보다 상대적으로 먼저 용출된다.

역상컬럼: 비극성인 컬럼과 극성인 이동상에 의해 극성 화합물이 먼저 용출된다.

이를 간단한 표로 살펴보면 다음과 같다.

	순상컬럼	역상컬럼
칼럼의 극성	극성	비극성
용매의 극성	비극성이거나 약한 극성	극성
시료의 용출순서	비극성 성분이 빨리 용출됨	극성 성분이 빨리 용출됨
소요되는 분석시간	분석시간이 길어짐	분석시간이 빠름
분석시료의 극성유무	시료가 극성임	시료가 비극성임

표에 정보를 간단하게 요약하면

1. 칼럼의 극성유무와 시료의 극성 유무가 같아야 한다.

2. 컬럼과 시료의 극성이 같을 때 용매(이동상)에 비해 늦게 용출된다.

3. 늦게 용출된 시료의 성분이 내가 찾고자하는 성분임으로 이를 확인한다.

 

컬럼에도 다음과 같이 구분이 되기 떄문에 세척 방법 및 세척에 사용되는 용매도 다양하다.

 

역상컬럼의 세척용매는

용액 내 염(salt)이 제거된 이동상을 사용한다.

100% Methanol, 100% Acetonitrile, 75% Aecetonitrile : 25% Isopropanol, 100% Methylene Chloride, 100% Hexane

위 용액들을 이용해 최소 25ml이상을 이용하여 세척을 진행한다.

주의사항으론 Methylene Chloride 나 Hexane을 사용한 경우 반드시 IPA로 세척 후 역상이동상 사용해야한다.

IPA를 이용하여 세척하지 않으면 Methylene Chloride 나 Hexane의 성분이 시료의 분리 시 영향을 주어 peak split이나 tailing이 발생하기 떄문에 해당 과정은 반드시 이루어져야한다.

 

순상컬럼의 세척용매는

50% Methanol : 50% Chloroform, 100% Ethyl Acetate과 같이 이동상(용매, MP)보다 강한 용매로 세척을 해줘야한다.

세척 시 세척용매의 비율을 증가시키거나 압력을 증가시키는 방향으로 세척을 진행해주는 것이 가장 이상적이다.

 

컬럼의 세척방법은 이외에도 매우 다양하다.

어떤 시료를 분리하고자하는지에 따라 컬럼의 성분이나 충진재가 다양하기 때문에 정형화된 방법이 아닌 컬럼마다 가지고 있는 세척방법을 따라 세척을 진행해주길 바란다.

 

또한 사용 시 세척은 반드시 이루어져야하며 장기간 컬럼을 보관할 경우 반드시 유기용매를 채워넣음으로써 컬럼내부가

건조해지는 것을 예방해야한다.

이상으로 컬럼의 이해 및 세척방법에 대한 글을 마친다.