HPLC의 이해

HPLC는 크로마토그래피라는 실험기법을 기반으로 만들어진 장비이다.

 

크로마토그래피 - 여러 가지 물질들이 섞여 있는 혼합물이 이동상을 타고 고정상에서 움직이며 반복적인 흡착, 분배, 이온교환 등을 거쳐 혼합물의 구성물질들 간 이동속도 차이에 따라 분리되는 실험기법을 의미

 

HPLC - 고정상에 고압으로 이동상을 흘려 기존 액체크로마토그래피에서 요구됐던 긴 분석시간을 단축시킨 기술로 높은 해상도와 신속한 분석이 가능하다는 장점을 가지고 있음.

 

HPLC 사용목적 - 시료가 컬럼을 지나는 동안 성분의 친화도 차이를 이용해 혼합물의 각 성분을 분리하여

목적 성분, 불순물의 존재를 확인(정성 시험)하고 목적 성분의 함량(정량 시험)을 확인하기 위함

 

HPLC

 

위에서부터 Solvent cabinet, Degasser, Pump, Injector & Auto sampler, Column Oven, Detector로 구성되어있다.

 

HPLC의 종류를 구분하는 기준은 Detector이다.

 

VWD - 가장 많이 사용되는 검출기로, 특정 발색단을 가지는 유기화합물이 UV 또는 가시광선영역에 빛을 받으면 흡수하는 원리로 가시광선 영역의 빛에 대한 흡광도를 측정하여 Beer의 법칙에 따라 성분의 농도를 측정하는 검출기

 

RID - 시료의 농도에 따른 굴절률의 차이로 물질의 함량을 확인하는 원리로, 두 용액 사이에 굴절률의 차이로 인해 물질을 검출한다. 즉, 굴절률의 차이를 이용하는 검출기

 

DAD - VWD를 개선시킨 검출기로, 수많은 Diode를 일렬로 배치하여 넓은 영역파장의 빛을 동시에 측정하는 원리로, 190~800 nm까지의 빛을 흡수하여 여러 범위의 측정이 가능한 검출기

 

FLD - 분자의 특정파장의 빛을 쏘았을 때, 이 빛을 흡수하여 들뜬상태가 된 분자가 안정된 바닥상태로 돌아가면서 빛을 방출하는데, 이 빛을 확인하여 물질의 정성과 정량을 확인하는 검출기

 

HPLC에 대해 간략히 알아보았다. 다음엔 좀 더 심화내용에 대해 다룰 예정이며, 사용 시 발생하는 오류상황이나

컬럼에 대한 자세한 설명을 진행하고자 한다.