Column의 이해

Column이란?

HPLC Colum oven 속 구성 및 Column

- 관 모양의 용기에 충진제를 채워서 사용하는 HPLC의 소모품 장비 중 하나로 분석하고자 하는 시료의

  종류에 따라 컬럼의 크기 및 충진제의 종류를 선택하여 사용할 수 있다.

컬럼의 다양성

Column의 역할은 혼합 상태의 시료를 화학적/물리적 특성에 따른 머무름 정도의 차이에 의해 분리한다.

 

Column은 다양한 시료를 분리하기 위해 매우 많은 종류의 column이 존재하는데 이를 선택 시 주의사항은 다음과 같다.

1. 충진재의 재질(Silica, Alumina etc.)

2. 충진재의 입자 크기(5um, 10um, 3.5um etc.)

3. 충진재의 형태(Spherical, irregular etc.)

4. 충진재의 pore size

 

HPLC Column에 문제가 발생할 수 있는지 확인할 수 있는 방법은 다음과 같다.

1. 압력(Pressure)

2. 피크 모양(Peak Shape)

3. 머무름 시간(Retention Time)

 

먼저 압력을 확인하기 위해선 컬럼 제거 전, 후 압력을 확인해준다.

컬럼에서 높은 압력을 보이는 주된 원인은 Frit 막힘, 컬럼 오염, 충진물 막힘 등이 원인이다.

이를 해결하기 위해

1.컬럼 세척: 컬럼 오염 물질과 막힌 입자 제거, 고분자 물질과 흡착된 물질 제거, 시료나 버퍼 침전물 제거를 위해

                     유기용매(Methanol, ACN etc.)나 물을 흘려준다.

2. Frit 교체 - Frit은 소모품으로 압력이상 시 확인해볼 부분 중 하나로 해당 부분을 교체함으로써 문제를 해결할 수 있다.

Purge valve에 들어가는 Frit

​3. 역방향 세척 - 가장 마지막에 사용하는 방법으로 위 2가지 방법으로도 압력이 높게 나온다면 컬럼의 flow에 반대되게 연결 후 세척을 진행하면 됩니다. 이 방법은 컬럼 내 충진재의 영향을 줄 수 있어 가장 마지막에 사용하는 것이 좋습니다.

 

피크모양, 머무름 시간에서 발견될 수 있는 문제상황과 순상컬럼, 역상컬럼에 대한 내용은 다음 글에서 확인해주시기 바랍니다.